引 言

蛋白質(zhì)和長(zhǎng)肽在生物體系中扮演著至關(guān)重要的角色，并且它們是許多重要治療藥物的構(gòu)成要素。然而，這些生物分子的研究進(jìn)展常常受到基于時(shí)間密集型表達(dá)技術(shù)和原生化學(xué)連接方法的限制。固相多肽合成（SPPS）為直接合成具有特定序列的蛋白質(zhì)提供了一種途徑，并能夠迅速產(chǎn)生結(jié)構(gòu)類(lèi)似物。盡管如此，由于在合成過(guò)程中雜質(zhì)的累積和產(chǎn)物聚集的傾向，長(zhǎng)肽和蛋白質(zhì)的SPPS合成面臨著不小的挑戰(zhàn)。在早期，SPPS主要被應(yīng)用于生產(chǎn)較短的片段，以便進(jìn)行原生化學(xué)連接，而對(duì)于較長(zhǎng)序列的合成能力相對(duì)受限[1]。近來(lái)，快速流動(dòng)式合成方法展示了其以極短周期時(shí)間組裝長(zhǎng)序列的顯著潛力。但這種方法的一個(gè)缺點(diǎn)是，它需要使用大量的氨基酸（通常是≥ 100當(dāng)量），并且伴隨著大量廢物的產(chǎn)生。

微波加熱技術(shù)現(xiàn)在已經(jīng)被普遍應(yīng)用于多肽合成，并且已經(jīng)證實(shí)其能夠有效地克服肽鏈聚集的難題，并促進(jìn)困難反應(yīng)的順利進(jìn)行[3,4]。通過(guò)結(jié)合優(yōu)化的碳二亞胺耦合條件和微波加熱（CarboMAX™ 技術(shù)），可以實(shí)現(xiàn)最小程度的差向異構(gòu)化，并且與傳統(tǒng)使用鏻鹽和強(qiáng)堿的更為激烈激活方法相比，能夠?qū)崿F(xiàn)更高純度的合成效果。此外，采用無(wú)需中間排放步驟的一鍋法耦合和脫保護(hù)流程，使得整個(gè)過(guò)程更加迅速和高效。

在2022年，推出了新一代的微波肽合成器系列——Liberty PRIME 2.0和Liberty Blue 2.0。這些先進(jìn)設(shè)備采用了創(chuàng)新的頂部沖洗技術(shù)，該技術(shù)在肽合成過(guò)程中能夠保持反應(yīng)容器表面的清潔度。通過(guò)預(yù)防揮發(fā)性試劑的再冷凝，頂部沖洗技術(shù)有效避免了對(duì)后續(xù)反應(yīng)的污染。隨著長(zhǎng)蛋白質(zhì)合成的進(jìn)行，每個(gè)反應(yīng)步驟中即使是微小的純度提升也會(huì)累積起來(lái)，最終轉(zhuǎn)化為整體純度的顯著提高。利用Liberty PRIME 2.0，成功合成了一系列具有挑戰(zhàn)性的蛋白質(zhì)，包括76個(gè)氨基酸的泛素、86個(gè)氨基酸的胰島素原、89個(gè)氨基酸的巴氏蛋白、99個(gè)氨基酸的類(lèi)膠原蛋白序列和HIV蛋白酶，以及127個(gè)氨基酸的MDM2。